聊聊一個在體外輔助生殖（ART）用耗材注冊過程中經常被問到的問題：對于那些用于操作配子（精子和卵子）、合子（受精卵）以及不同發育階段胚胎細胞的耗材產品（注意啊，這里明確排除了培養液之類的液體產品），當我們已經按照國家標準GB16886.1《醫療器械生物學評價 第1部分：風險管理過程中的評價與試驗》完成了全套的生物學評價后，是不是就萬事大吉了？還需要額外做那個聽起來就挺專業的“鼠胚試驗”嗎？這個問題直接關系到產品的安全性和能否順利注冊上市，咱們必須得弄明白。答案其實很明確：必須做！這不是可選項，而是法規和標準要求的強制性補充評價。為什么呢？咱們往下看就清楚了。這些耗材直接接觸的是生殖過程中最敏感、最脆弱的細胞——人類的精卵和早期胚胎。GB16886.1提供的是基礎、通用的生物學安全評價框架，但它并不能完全模擬和覆蓋這些特殊細胞在體外復雜培養環境中可能面臨的、由器械材料或工藝帶來的特定風險。想想看，一個微小的毒性反應或不利影響，對普通組織可能沒啥，但對一個正在努力分裂發育的早期胚胎來說，可能就是滅頂之災。所以，為了確保這些關鍵耗材對胚胎發育真正安全無害，光做常規生物學評價是不夠的，必須加上一道專門為它們設計的“安全鎖”——體外鼠胚試驗。

理解體外輔助生殖用耗材的特殊性

首先得搞清楚我們討論的對象是什么。這里說的耗材，指的是在體外輔助生殖技術操作中，除了培養液、緩沖液等液體之外，那些直接用來接觸、操作、轉移或儲存人類配子（精子、卵子）、合子（受精卵）以及早期胚胎（比如2細胞期、4細胞期、桑葚胚、囊胚等）的器械。常見的例子包括取卵針、胚胎移植管、顯微操作針（ICSI針）、培養皿、離心管、移液管頭（特定用于生殖細胞操作的）、卵母細胞/胚胎冷凍載桿等等。這些產品的核心特點是：它們的直接作用對象是生殖細胞和早期胚胎。這些細胞不同于體細胞，它們處于生命發育的最初階段，對外界環境極其敏感，任何微小的化學物質浸出、物理刺激或表面特性的不適，都可能干擾其正常的受精、分裂、發育過程，最終影響胚胎質量和妊娠結局。

GB16886.1生物學評價的核心內容和局限性

GB16886.1是我們醫療器械生物學評價的基石標準。它要求我們從產品的材料、預期用途、與人體接觸的性質（接觸部位、接觸時間）等角度進行全面的風險分析，并據此選擇必要的生物學試驗項目。常規的評價項目可能包括細胞毒性試驗（看材料會不會直接毒死細胞）、致敏試驗（看會不會引起過敏）、刺激或皮內反應試驗（看對組織有沒有刺激性）、急性全身毒性試驗、遺傳毒性試驗（看會不會損傷DNA）、植入后局部反應試驗（針對長期植入物）等等。這些試驗非常重要，覆蓋了醫療器械生物學安全的主要方面。但是，它們存在一個關鍵的局限性：這些試驗使用的測試系統（如L929小鼠成纖維細胞、豚鼠皮膚、兔子肌肉、細菌或哺乳動物細胞系用于遺傳毒性等）無法準確模擬和評估產品對人類生殖細胞和早期胚胎發育的潛在特異性影響。一個材料對成纖維細胞沒有毒性，不代表它對小鼠或人類的早期胚胎也沒有不良影響。胚胎發育是一個高度復雜和精密調控的過程，有其獨特的敏感性和易損性。常規的生物學試驗模型無法捕捉到這種針對胚胎發育的特異性毒性風險。

為什么必須進行鼠胚試驗？法規與標準要求

正是基于上述的特殊性和常規評價的局限性，國內外監管機構和標準組織都明確要求，對于直接接觸配子和胚胎的ART用耗材（液體產品有類似但不同的要求），在完成GB16886.1要求的生物學評價后，必須額外進行體外鼠胚試驗。這并非可有可無，而是強制性的安全評價環節。國家藥品監督管理局醫療器械技術審評中心（器審中心）在歷次發布的注冊問題答疑中反復強調這一點。例如，在器審中心發布的答疑中明確指出：“體外輔助生殖用耗材（體外輔助生殖用液除外）產品的作用對象是配子、合子及不同發育階段的胚胎細胞，除常規生物學評價外，還應參照YY/T1434-2016進行體外鼠胚試驗。” 這個要求在北京、上海等地的醫療器械審評檢查常見問題解答中也被多次重申。

鼠胚試驗的執行標準：YY/T1434-2016

這項強制性試驗的具體操作方法和要求，詳細規定在國家醫藥行業標準 YY/T1434-2016《人類體外輔助生殖技術用醫療器械 體外鼠胚試驗》中。這個標準是專門為評價ART醫療器械（包括耗材和用液）對胚胎發育的潛在毒性而制定的。它的核心原理是：利用小鼠的早期胚胎（1-細胞受精卵或2-細胞胚胎）作為模型，在體外培養過程中，模擬該耗材產品在實際ART操作中的使用方式（例如，將耗材的浸提液加入培養環境，或直接用耗材接觸胚胎），觀察這些胚胎能否在設定的培養時間內（通常1-細胞胚胎培養96小時，2-細胞胚胎培養72小時）正常發育到囊胚階段，并評估形成的囊胚質量。通過比較供試品組（使用待測耗材）、陰性對照組（使用已知安全的培養液和耗材）和陽性對照組（使用已知有毒性的物質）的囊胚形成率和囊胚質量，來判斷待測耗材是否對胚胎發育存在潛在毒性。

鼠胚試驗的關鍵步驟概述

1.試驗準備：

（1）供試品處理： 根據待測耗材的形態（固體/器具）和預期接觸方式（如接觸時間長短），按照GB/T 16886.12和YY/T 1434的要求制備供試品浸提液。推薦使用M16培養液作為浸提介質。

（2）對照組設置：必須設立陰性對照組（通常使用M2/M16培養液及已知安全的耗材）和陽性對照組（使用經驗證對胚胎有毒性的物質）。陽性對照用于證明試驗系統的敏感性，陰性對照用于提供正常發育的基線。

（3）試驗動物與胚胎獲取：選用6-8周齡健康雌鼠，通過激素（PMSG和hCG）注射誘導超數排卵，并與同品系雄鼠交配。在注射hCG后特定時間點（取1-細胞胚胎約18-22小時，取2-細胞胚胎約40-48小時）處死孕鼠，從輸卵管中收集胚胎。推薦優先使用1-細胞胚胎。

（4）培養皿準備：在培養皿中制備覆蓋培養用油的培養液微滴（30-50μL），并在CO2培養箱中預平衡。

2.胚胎分組與培養：

（1）將收集到的形態正常的胚胎（每組通常不少于50個，且來自3-5只不同母鼠的胚胎應隨機分配到各組）隨機分配到供試品組、陰性對照組和陽性對照組。

（2）將胚胎置于已平衡好的相應培養液（供試液、陰性對照液、陽性對照液）微滴中。

（3）在嚴格控制的環境下（37°C, 5%或6% CO2, 飽和濕度）進行體外培養。1-細胞胚胎培養至96小時，2-細胞胚胎培養至72小時。

3.結果觀察與判定：

（1）在培養結束時，在顯微鏡下觀察并記錄各組發育到囊胚階段的胚胎數量，計算囊胚形成率。

（2）評估形成的囊胚質量，區分發育良好的囊胚（囊胚腔充分擴張，內細胞團大小適中，滋養層細胞緊密均勻）和發育差的囊胚（囊胚腔小，內細胞團小或無，滋養層細胞稀疏）。

（3）標準（YY/T1434）通常要求供試品組的囊胚形成率需達到陰性對照組的一定比例（例如不低于80%或具體標準規定值），且囊胚質量應良好，才能判定該耗材在本試驗條件下對鼠胚發育無潛在毒性。需要與陰性和陽性對照組的結果進行統計學比較分析。

進行鼠胚試驗的注意事項

（1）實驗室條件：試驗必須在具備嚴格環境控制（潔凈度、溫濕度）的專業生殖實驗室進行，避免環境因素干擾。

（2）試驗設計嚴謹性：

（3）樣品代表性：建議測試樣品應覆蓋不同生產批次，特別是零時刻（剛生產）和貨架有效期終點的產品，以評估產品老化及與包裝容器相互作用的影響。

（4）設置上市產品對照：強烈建議在試驗中增設一個已上市同類產品作為對照組（除陰性和陽性對照外）。這有助于在試驗結果出現異常時進行更準確的判定，并為試驗質量提供參照。目前很多提交的報告中缺乏此項。

（5）接觸方式模擬：試驗步驟（特別是供試品與胚胎的接觸時間、接觸方式）應盡可能模擬該耗材在人類ART實際操作中的使用情況。YY/T1434的附錄B提供了針對不同接觸時間耗材的試驗策略指導。例如，胚胎移植管接觸時間短，其試驗設計就應與培養皿（長時間接觸）不同。

（6）試劑耗材安全性：試驗中使用的所有基礎培養液、耗材（如培養皿、移液管頭）等，理論上都應是已通過鼠胚試驗驗證安全無毒的。實際操作中這可能有難度，但應盡量選擇來源可靠、背景清晰的材料。

結論

所以，回到最初的問題：“體外輔助生殖用耗材（體外輔助生殖用液除外）產品按照GB16886.1進行了生物學評價后還應進行鼠胚試驗嗎？” 答案是肯定的、必須的。GB16886.1是基礎，提供了通用的生物學安全框架。但對于這些直接接觸人類生命起點的、極其脆弱的生殖細胞和早期胚胎的特殊耗材，僅靠基礎評價遠遠不夠。YY/T1434-2016規定的體外鼠胚試驗是法規和標準明確要求的、針對胚胎發育特異性毒性的關鍵評價手段。它利用小鼠胚胎模型，模擬實際操作環境，直觀評估耗材對胚胎分裂、發育直至形成囊胚能力的影響。只有通過了這項嚴格的“胚胎安全測試”，并結合GB16886.1的全面評價結果，才能更有力地證明這類耗材在生物學上是安全的，才能為它們在體外輔助生殖技術中的安全應用提供堅實的科學依據，最終支持其成功注冊上市。

希望這篇文章能清晰解答您的疑問。如果您在具體產品的注冊申報過程中遇到鼠胚試驗的設計或實施問題，思途CRO的專業團隊可以提供符合法規要求的支持服務。